Interferencia de heparina en la determinación de proteínas totales por el método de Bradford

Resumen

La determinación de proteínas totales es una técnica de rutina utilizada en la industria biofarmacéutica durante los procesos de purificación de derivados plasmáticos y/o producción de proteínas recombinantes; y la elección del método analítico es un paso crítico para la obtención de resultados confiables. En este trabajo se demostró la interferencia de heparina (Hep), un compuesto comúnmente utilizado como excipiente en la formulación de Concentrados de Factores de la Coagulación (CFC), en la determinación de proteínas por el método de Bradford, cuya interferencia no está descripta como tal en los insertos de los kits comerciales de Bradford ni en la Farmacopea Europea. Esta interferencia fue demostrada tanto en soluciones de Albúmina Sérica Bovina (BSA) fortificadas con Hep, como en muestras de CFC. Para una solución de BSA 40 mg %, la concentración límite de Hep que no interfiere en la determinación de proteínas totales fue de 1,6 UI/ml. Cabe destacar que, si se trabaja a un nivel menor de concentración de proteínas, una proteína diferente o mezclas complejas de proteínas, se debe evaluar el grado de interferencia para cada caso particular, pudiéndose utilizar los valores obtenidos en este trabajo como referencia. Alternativamente, se evaluó la neutralización de la Hep con Polybrene (Poly), previo a la determinación de proteínas por Bradford. En el caso de soluciones de BSA, el efecto interferente se revirtió logrando una correcta cuantificación de proteínas, mientras que en las muestras de CFC, la neutralización con Poly no fue efectiva. Por lo tanto, para considerar el uso de Poly, previo a la aplicación del método de Bradford, debe evaluarse cada caso particular según las características de la muestra proteica en estudio. Si esto no es posible, se recomienda la utilización de un método alternativo, por ejemplo, el colorimétrico que utiliza ácido bicinconínico.