Puesta a punto del método para la detección de genes stx₁, stx₂ y eae según norma ISO 13136:2012 utilizando PCR de punto final a partir de cepas de E. coli

Resumen

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) causa casos esporádicos y brotes de diarrea, con o sin presencia de sangre, así como síndrome urémico hemolítico (SUH). El serotipo O157:H7 es endémico y el de mayor prevalencia en nuestro país. Las toxinas Shiga, la proteína intimina, y la enterohemolisina son los principales factores de virulencia. Entre los alimentos con riesgo de contaminación por STEC, se incluyen los productos cárnicos, principalmente aquellos provenientes de carnicerías que no aplican buenas prácticas de manufactura o de establecimientos no autorizados. En el presente trabajo se puso a punto el Anexo C: Identificación de STEC por amplificación múltiple por PCR de los genes de virulencia y la detección de los productos de PCR en gel de agarosa de la Norma ISO 13136:2012 “Microbiología de alimentos y piensos - Métodos basados en PCR para la detección de patógenos alimentarios - Método de plaqueo para la detección de STEC y la determinación de los serogrupos O157, O111, O26, O103 y 0145”. Su ejecución permitió llevar a cabo la metodología de detección de genes productores de toxinas, stx₁ y stx₂, y el gen del factor de adherencia eae. Asimismo, se verificó la especificidad y sensibilidad de la metodología, junto con la evaluación de la robustez del colorante, garantizando así la confiabilidad de los resultados. La implementación de esta metodología permite al Servicio de Microbiología confirmar las cepas de STEC, aisladas de muestras de alimentos, mediante la técnica de PCR punto final, una técnica más económica que la técnica de PCR en tiempo real, que permitirá al laboratorio ahorrar recursos y, al mismo tiempo, posibilitará la implementación de estrategias de prevención y control fundamentales para disminuir la morbi-mortalidad asociada al SUH y colaborar con el estudio epidemiológico en nuestro país.